传代培养的定义
传代培养subculture将培养细胞从培养器中取出,把一部分移至新的培养器中再进行培养,这种培养方式称为传代培养,亦称为继代培养或连续培养。当原代培养成功以后,随着培养时间的延长和细胞不断分裂,一则细胞之间相互接触而发生接触性抑制,生长速度减慢甚至停止;另一方面也会因营养物不足和代谢物积累而不利于生长或发生中毒。此时就需要将培养物分割成小的部分,重新接种到另外的培养器皿(瓶)内,再进行培养。这个过程就称为传代(passage)或者再培养(subculture)。对单层培养而言,80%汇合或刚汇合的细胞是较理想的传代阶段。
植物组织培养八个步骤
植物组织培养是指将植物体细胞、组织或器官以无菌条件培养在含有营养物质和植物激素的培养基上,以便进行繁殖、分化、再生和转化等研究。下面是植物组织培养的八个步骤:
1.器皿准备:准备无菌的培养器皿、移液器、剪刀、镊子、培养基等实验器材。
2.材料准备:选取健康的植物组织或器官,如幼芽、幼叶、愈伤组织等,并进行表面消毒。
3.培养基制备:根据研究目的选择适当的培养基配方,如MS培养基、B5培养基等,并加入适量的植物激素和营养物质。
4.植物组织分离:将材料分离成单个细胞或小块组织,并在无菌条件下移植到培养基上。
5.培养条件控制:调节培养条件,如光照、温度、湿度、通气等,以促进组织的生长和分化。
6.无菌技术控制:确保培养过程中细菌、真菌等微生物的污染率尽可能低,并采取相应的消毒和无菌操作措施。
7.培养组织的传代:根据培养细胞或组织的生长速度和状态,定期更换新的培养基,以保持培养组织的活力。
8.组织再生或转化:通过控制培养基中的植物激素浓度、光周期、温度等因素,促进组织的再生或转化,如愈伤组织的分化、植物的遗传转化等。
水培水稻培养条件
一种水上种植水稻的方法,属于一种水稻的水培技术。采用具有浮力大、质轻且不污染水质的化学材料板为浮体,在浮体上按行株距要求制有固植孔,并在其贴水面上制有横竖交叉并连通固植孔的通气沟,水稻秧苗根部用海绵加以包裹后插入固植孔内,将浮体漂浮在水上并进行必要的管理。该方法种植成本较以往水培法大大降低,既发展水上种植,不影响水下养殖,又可以净化水质,且不怕旱、涝,实用方便,具有潜在的推广应用前景。
一种水上种植水稻的方法,其特征在于选用容重小于500kg/m↑,且不污染水质的化学材料板为浮体,按水稻生长行株距要求,在浮体上制有固植孔,将水稻秧苗植入固植孔内,并将浮体漂浮在水面上。
为什么要传代培养
传代培养是指需要将培养物分割成小的部分,重新接种到另外的培养器皿(瓶)内,再进行培养的过程。对单层培养而言,80%汇合或刚汇合的细胞是较理想的传代阶段。
传代方法:
1、悬浮生长细胞传代
多采用离心法传代。1000转/分,20-30秒后去上清。沉淀细胞加新培养液后再混匀传代。亦有直接传代法,即悬浮细胞沉淀在瓶壁时,将上清培养液去除1/2-1/3,然后用吸管直接吹打形成细胞悬液再传代。
2、半悬浮生长细胞传代(Hela细胞)
此类细胞部分呈现贴壁生长现象,但贴壁不牢,可用直接吹打法使细胞从瓶壁脱落下来,进行传代。
3、贴壁生长细胞传代
采用酶消化法传代。常用的消化液有0。25%的胰蛋白酶液。
香蕉组织培养繁殖技术
用于大规模种植的香蕉的种苗生产多采用组培快繁技术,利用它不仅能在短期内获得大量的试管苗,而且能脱去花叶病等病毒,有利于提高产量。
⑴外植体消毒和初代培养:操作时,在无传统病害的香蕉种植区,选用生势强健、挂果整齐、产量高的母株,挖取刚露出地面的吸芽作为诱导材料。消毒时先剥除吸芽外面的叶鞘,用水冲洗干净。在无菌条件下用75%酒精溶液消毒30秒钟,再用浓度为0.1%的HgCl?消毒20分钟,然后再用无菌水冲洗7~8次,切取其茎尖,将茎尖分为2份,放在MS+3~6毫克/升BA+糖3%+琼脂7.0克/升的诱导培养基中,置于黑暗的光照培养箱中,保持温度28~30℃,培养40~50天即可出芽。
⑵丛生芽的继代增殖:可将初代培养所得到的丛生芽在MS+3~6毫克/升BA+0.2毫克/升NAA+糖3%+琼脂7.0克/升的培养基中进行继代增殖,在28~30℃,1500lx光照环境中培养20~25天即可继代增殖1次,并获得2.0~2.7倍的增殖率。在培养过程中应有充分的光照,每天1500lx光照时间应不少于8小时,如果没有光照或光照不足,则其假茎和叶柄的颜色退淡、转绿,甚至变为白色,影响增殖率。继代培养一般不超过12代,否则易引起突变
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